對(duì)于Matrix標(biāo)準(zhǔn)型含酚紅基質(zhì)膠您了解多少?
 

　　基底膜是動(dòng)物體內(nèi)上皮細(xì)胞基底面的一層基質(zhì)膜。LYNJUNE®Matrix是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)  小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分，所形成的基質(zhì)膠。該基質(zhì)膠主要成分為laminin，collagen IV，heparan sulfate  proteoglycans(Kleinman et al.  1986)。同時(shí)，該基質(zhì)膠也包含多種生長(zhǎng)因子，例如表皮生長(zhǎng)因子EFG，血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF，神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF-2，乙型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-beta和胰島素樣生長(zhǎng)因子ILGF(Vukicevic  et al. 1992)。

　　產(chǎn)品來(lái)源：

　　Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分

　　產(chǎn)品儲(chǔ)存：

　　建議您融化后先按照單次用量進(jìn)行分裝，保存-20°C冰箱，有效期2年。

　　產(chǎn)品性質(zhì)：

　　本品在4°C條件下為液態(tài)，但在加熱到37°C時(shí)呈凝膠狀態(tài)?；|(zhì)膠凝固后，重新放回4°C過(guò)夜，基質(zhì)膠可再次液化。

　　注意事項(xiàng)：

　　該基質(zhì)膠在溫度高于10°C時(shí)就會(huì)開(kāi)始凝固成膠，所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。類(lèi)器官傳代時(shí)，如果為了避免酶對(duì)類(lèi)器官造成影響，可直接用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)基質(zhì)膠進(jìn)行緩慢吹打，即可將類(lèi)器官?gòu)幕|(zhì)膠中釋放出來(lái)。

　　產(chǎn)品應(yīng)用：

　　本品適用于類(lèi)器官生長(zhǎng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究，體內(nèi)和體外血管生成實(shí)驗(yàn)。

　　操作方法：

　　一、腫瘤類(lèi)器官藥敏實(shí)驗(yàn)(操作所需時(shí)間為2小時(shí))

　　1.將擴(kuò)增好足夠量的腫瘤類(lèi)器官(實(shí)驗(yàn)組)以及正常類(lèi)器官(對(duì)照組)用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，緩慢機(jī)械吹打，促進(jìn)膠液化溶解，并保持類(lèi)器官結(jié)構(gòu)完整(可用于懸浮培養(yǎng)于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面)(Guillen  et al. 2022)?；蛘咄ㄟ^(guò)TryplE酶消化獲得單細(xì)胞懸液。

　　2.離心收集類(lèi)器官細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

　　3.加入LYNJUNE®基質(zhì)膠原液，與細(xì)胞進(jìn)行混勻。

　　4.將細(xì)胞與膠的混合物，通過(guò)排槍加入37°C預(yù)熱過(guò)的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養(yǎng)箱。

　　5.大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固，加入相應(yīng)體積的類(lèi)器官培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。

　　6.類(lèi)器官形成后(如果是機(jī)械吹打，類(lèi)器官將在傳代24h后就會(huì)形成;如果是酶消化，類(lèi)器官會(huì)在3-5天后形成)，每個(gè)孔分別加入含有PI染料以及不同種類(lèi)、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。

　　7.用高內(nèi)涵顯微鏡上進(jìn)行活細(xì)胞成像，測(cè)定腫瘤類(lèi)器官對(duì)各種藥物的敏感性。

　　二、血管生成實(shí)驗(yàn)(以永生化HUVEC細(xì)胞系為例，操作所需時(shí)間為1小時(shí))

　　1.將培養(yǎng)基換成饑餓細(xì)胞用培養(yǎng)基：加入含0.2% FBS，2mM  L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，100U/ml青霉素和100µg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)。

　　2.將LYNJUNE®基質(zhì)膠均勻鋪滿(mǎn)96孔板底。注意：槍頭需提預(yù)冷半小時(shí)。盡量在冰上操作，避免基質(zhì)膠過(guò)早固化，避免氣泡產(chǎn)生。

　　3.將96孔板在細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育30min，固化基質(zhì)膠。

　　4.消化HUVEC細(xì)胞，并計(jì)數(shù)。

　　5.將200µL的HUVEC細(xì)胞懸液(含5X10^4個(gè)細(xì)胞)加于含基質(zhì)膠的96孔板中。將96孔板放于培養(yǎng)箱。

　　6.血管樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)將于3至12小時(shí)間形成。

　　7.在血管網(wǎng)絡(luò)形成時(shí)，小心去除培養(yǎng)基，并用加入含活細(xì)胞染料1/1000 Calcein AM(綠色)的培養(yǎng)基進(jìn)行染色，并用顯微鏡進(jìn)行拍照記錄。

　　三、神經(jīng)軸突3D生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)(以大鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞為例，操作所需時(shí)間為2小時(shí))

　　1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科鑷分離出大腦皮層于4°C預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基中。

　　2.用吸管輕緩吹打，然后用70µm濾網(wǎng)過(guò)來(lái)，獲得單細(xì)胞懸液，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

　　3.離心(300g，3min)，棄上清。將細(xì)胞與LYNJUNE®基質(zhì)膠進(jìn)行混合，然后將基質(zhì)膠混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。

　　4.將24孔板放于培養(yǎng)箱，大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固。加入1mL神經(jīng)元分化培養(yǎng)基：Neurobasal medium，2%  B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL  streptomycin。第二天開(kāi)始，就能觀察到有明顯的神經(jīng)軸突生長(zhǎng)。

　　5.在第7天可觀察到大量的神經(jīng)突(Neurite)長(zhǎng)出。

　　參考文獻(xiàn)：

　　1. Kleinman HK, et al, Basement membrane complexes with biological  activity. Biochemistry 25: 312 (1986).

　　2. Vukicevic, Slobodan, et al. Identification of multiple active growth  factors in basement membrane Matrigel suggests caution in interpretation of  cellular activity related to extracellular matrix components. Experimental cell  research 202: 1 (1992).

　　3. Guillen, K P, et al. A human breast cancer-derived xenograft and  organoid platform for drug discovery and precision oncology. Nature Cancer 3:  232 (2022).

　　僅 供 研 究 用 途 ，不 得 用 于 診 斷 或 治 療 程 序 。

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